生物素与亲和素/链霉亲和素的非共价结合是已知最强的分子相互作用之一，解离常数（Kd）在飞摩尔至低皮摩尔范围[1]，亲和力比抗原-抗体反应高10-100万倍[2]。其极慢的解离速率和超高亲和力使其成为抗体药物研发和蛋白质研究的核心工具。然而，生物素标记蛋白制备常面临标记不完全、批间差异大、稳定性不足等挑战，限制了其在高精度实验中的应用。
近岸蛋白提供160+款生物素标记蛋白和抗体，覆盖细胞治疗、抗体药物、疫苗等热门靶点，采用人源细胞表达，经HPLC验证纯度，ELISA/BLI检测活性，确保高批间一致性和优异性能。我们提供Avi-Tag定点标记和化学标记两种定制服务，满足多样化实验需求，助力加速药物开发。
高品质产品：批间一致性高，活性经SPR/BLI、ELISA验证，适用于蛋白质纯化、抗体筛选、蛋白互作研究等。
定制化服务：Avi-Tag与化学标记技术灵活选择，支持个性化实验设计。
广泛适用性：支持SPR、BLI、ELISA、亲和层析、抗体筛选等实验，助力基础研究与药物开发。
核心应用场景
1
蛋白质互作研究
生物素-链霉亲和素系统在表面等离子共振（SPR）等技术中表现卓越。SPR芯片表面修饰链霉亲和素，可牢固结合生物素标记的目标蛋白。分析物注入流动池后，若与目标蛋白发生特异性结合，将引发共振信号变化，精准分析亲和力、结合动力学等，广泛用于蛋白-蛋白、蛋白-小分子互作研究。
2
亲和层析纯化
生物素标记蛋白通过与固定在层析柱上的链霉亲和素/亲和素特异性结合，实现高效纯化。该方法选择性强，显著减少非特异性结合，纯化效率高。洗脱条件灵活，可通过pH调节、竞争性配体（如游离生物素）或温和条件释放目标蛋白，保护活性。
3
抗体筛选与表征
高灵敏度检测：生物素标记增强ELISA、Western Blotting、流式细胞术等信号放大。通过生物素标记的二抗与链霉亲和素偶联的酶/荧光团结合，低丰度抗原也能被精确检测。
亲和力与特异性评估：生物素化抗原固定于链霉亲和素表面，与候选抗体孵育后，通过链霉亲和素标记的检测系统快速筛选高亲和力、高特异性抗体，优化候选分子。
Avi-Tag生物素标记
Avi-Tag是一个由15个氨基酸残基组成的短肽标签，通常链接至蛋白的N-或C-末端，对蛋白活性影响很小。Avi-Tag在体内或体外都能被生物素连接酶（BirA）在赖氨酸残基连接上一个生物素，从而实现蛋白的生物素化。
BirA酶催化AviTag生物素化示意图
化学标记法
化学标记法是将蛋白N-末端游离胺基及内部的赖氨酸侧链上的胺基与生物素分子结合，通常一个蛋白质分子会被标记上多个生物素分子。化学标记法具有灵敏度高、tag free等特点，是常用的生物学方法之一。
带NHS基团的生物素可与目标分子（蛋白质）上的胺基反应
不同生物素标记蛋白优缺点
| 对比 |
Avi-Tag生物素标记 |
化学标记法 |
| 是否需要tag |
是 |
否 |
| 是否定点 |
定点 |
非定点，随机 |
| 标记均一性 |
均一 |
可能不均一，易过度生物素化 |
| 时间周期 |
与蛋白一起构建，然后表达纯化等，预计4周时间 |
在有蛋白/抗体的前提下，预计1周时间 |
部分数据展示
生物活性经ELISA抗体结合验证
Immobilized Biotinylated Human PD-1 (C-6His-Avi)(Cat#CY18) at 2 μg/ml (100 μl/well) can bind Anti-Human PD-1 mAb. The ED50 of Human Anti-Human PD-1 mAb is 8.83 ng/ml.
生物活性经BLI抗体亲和力验证
Loaded Anti-Human PD-1 mAb-Fc on Protein A Biosensor, can bind Biotinylated Human PD-1 (C-6His-Avi)(Cat#CY18) with an affinity constant of 1.54 nM as determined in BLI assay.
Immobilized Recombinant Human CALCRL RAMP1 Heterodimer Protein (C-Fc)(Cat#C39Y) at 2 μg/ml (100 μl/well) can bind Human CGRP Antibody (Erenumab, Research Grade)(Cat#NC318): Biotinylated by NHS-biotin prior to testing. The ED50 of Human CGRP Antibody (Erenumab, Research Grade)(Cat#NC318) is 16.13 ng/ml.
Immobilized Human C5AR1 Antibody (Avdoralimab, Research Grade)(Cat#NC348) at 10 μg/ml (100 μl/well) can bind Recombinant Human C5AR1 N-ECD (C-Fc)(Cat#C45Y): Biotinylated by NHS-biotin prior to testing. The ED50 of Recombinant Human C5AR1 N-ECD (C-Fc)(Cat#C45Y) is 2.623 ug/ml.
部分生物素化靶点
| PD-1 |
HER2 |
TSLP |
EGFR |
| PD-L1 |
Trop-2 |
VEGFR |
EpCAM |
| CTLA-4 |
CLDN 18.2 |
IgG1 Fc |
CD30 |
| LAG-3 |
MSLN |
PCSK9 |
PD-L2 |
| TIGIT |
GPC3 |
CXADR |
FcRn |
| TIM-3 |
Nectin-4 |
LDL R |
CD52 |
| CD47 |
CD20 |
DR5 |
CA125 |
| B7-H3 |
BCMA |
CD36 |
TGF-beta 3 |
| OX40 |
CD79B |
P-selectin |
TGF-beta 1 |
| 4-1BB |
CD22 |
IL-3R |
LRRC15 |
参考文献
[1]Dechancie J , Houk K N .The origins of femtomolar protein-ligand binding: hydrogen-bond cooperativity and desolvation energetics in the biotin-(strept)avidin binding site.[J].Journal of the American Chemical Society, 2007, 129(17):5419.DOI:10.1021/ja066950n.
[2]Vito A D , Reitano E , Poggi L ,et al.Biotin oligonucleotide labeling reactions: A method to assess their effectiveness and reproducibility[J].Analytical Biochemistry, 593[2025-06-05].DOI:10.1016/j.ab.2020.113590.