狂犬病是一种疫苗可预防的人畜共患病毒性疾病，影响中枢神经系统。一旦出现临床症状，狂犬病致死率几乎100%。犬是我国狂犬病的主要传染源，约占95%，其次为猫。接种狂犬病疫苗是预防狂犬病的有效方法。
狂犬疫苗研发上市情况一览
截至2023年12月12日，药渡数据库显示，全球有81个狂犬病疫苗，包含25个上市疫苗[1]。中国获批上市的人用狂犬病疫苗共有22种，根据所采用的细胞基质不同可分为：人二倍体细胞、Vero细胞（非洲绿猴肾细胞）、地鼠肾细胞及鸡胚细胞狂犬病疫苗等[2]。根据 Frost Sullivan 调研，2015 年至 2018 年，我国人用狂犬病疫苗市场的销售收入从 16.8 亿元上升至 28.4 亿元人民币，且预计将于 2023年达到 42.5 亿元，2018 年至 2023 年的年复合增长率为 8.4%。
尽管目前的狂犬病疫苗取得了成功，但存在一定的局限，如需要复杂的接种程序（5针或4针），接种费用高昂，异源蛋白和核酸引入等。
因此，安全性更高、免疫原性更高、成本更低的mRNA疫苗和重组亚单位疫苗有望替代部分传统狂犬疫苗。目前全球布局了10个mRNA和2个重组亚单位人用狂犬病疫苗[1]。
此外，为了进一步降低狂犬病的发病率和死亡率，政府也颁布了一系列的犬类管理政策，规定饲养犬只应按规定定期接种狂犬疫苗。从其他国家的成功经验来看，狂犬病的防治从人转向动物是必然趋势，宠物用狂犬病疫苗市场规模有望持续扩大。中国兽用狂犬疫苗市场中，进口疫苗占比高达九成，有4家进口疫苗生产企业，国产宠物用狂犬疫苗有11家，未来宠物狂犬疫苗有较大国产替代空间[3]。
近岸蛋白以创新的蛋白原料和完善的服务为基础，为人用或兽用狂犬病毒重组亚单位疫苗和mRNA疫苗研发提供全流程解决方案。
狂犬病毒介绍
狂犬病病毒属于单股负链病毒目（Mononegavirales）弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病病毒属（Lyssavirus）。我国目前主要流行 Rabies virus（RABV）。RABV是一种子弹形状的负链RNA病毒，有5种结构蛋白，包括核蛋白(nucleoprotein，N)、磷蛋白(phosphoprotein，P)、基质蛋白(matrix protein，M)、糖蛋白(glycoprotein，G)以及RNA依赖的RNA聚合酶大蛋白(RNA-dependent RNA polymerase large protein，L)，其中糖蛋白是病毒粒子表面唯一的蛋白，在RABV感染宿主后结合细胞表面的受体帮助入侵，同时也能够刺激机体产生保护性中和抗体。
图1 RABV病毒结构[4]
1.狂犬病毒重组亚单位疫苗开发
1.1 早期研发
针对早期研发，近岸蛋白可以为候选分子设计、筛选及优化、免疫原性评价提供相关服务和产品。从免疫原性预测、病原体亚型覆盖、蛋白质结构改造、多联多价设计等角度，开展候选分子设计工作。除提供高通量抗原表达服务外，近岸蛋白还为各种筛选实验提供等。
1.2 CMC生产
在疫苗生产过程阶段，近岸蛋白可以提供表达细胞株构建、工业菌株构建、发酵及纯化工艺开发等服务和GMP级全能核酸酶。
1.3 CMC质量控制
在疫苗的生产和质控过程中，近岸蛋白提供FDA DMF备案的GMP级全能核酸酶BenzoNuclease?（目录号：GMP-1707）及配套酶残留检测试剂盒（目录号：PA018），高效去除核酸残留。
此外，近岸蛋白还提供HCD检测试剂盒及数字PCR预混液，多种检测试剂可供选择。
1.4 体外药效评估
在疫苗的体外药效评估阶段，近岸蛋白可以提供生物学活性验证（细胞、小动物）、细胞与体液免疫评价相关抗原、抗体。
狂犬病毒重组亚单位疫苗研发相关部分产品
| 货号 |
产品名称 |
应用 |
| DA111 |
RABV Glycoprotein Antibody (5G10) |
用于抗体评价，ELISA验证 |
| DRA244 |
RABV Glycoprotein |
抗原/免疫原标准品，ELISA验证 |
| GMP-1707 |
BenzoNuclease?, GMP Grade |
去核酸残留 |
| PA018 |
BenzoNuclease? ELISA Kit |
酶残留检测 |
验证数据
经SDS-PAGE验证，RABV Glycoprotein(货号:DRA244)纯度大于95%。
Greater than 95% as determined by reducing SDS-PAGE
经BLI验证，RABV Glycoprotein Antibody (5G10)(货号：DA111)与RABV Glycoprotein(货号:DRA244)结合的亲和力强。
Loaded Recombinant RABV Glycoprotein (Cat#DRA244) on HIS1K Biosensor, can bind RABV Glycoprotein Antibody (5G10)(Cat#DA111) with an affinity constant of 9.56 nM as determined in BLI assay
2. RSV mRNA疫苗
2.1 早期研发
抗原/mRNA序列设计服务
基于上万种蛋白设计经验和文库优势，近岸蛋白可进行抗原设计，亦可对mRNA的UTR、密码子、Poly(A)尾、IRES序列优化等进行序列优化。
疫苗候选分子筛选确认
| 产品 |
服务 |
| 抗原/检测抗体 |
高通量基因合成 |
| 细胞免疫（RABV抗原） |
高通量质粒制备 |
| 体液免疫评估（抗原） |
高通量mRNA制备 |
| 质粒制备用PCR/克隆试剂 |
高通量LNP包封 |
|
兔多抗制备 |
|
免疫效价检测 |
2.2 CMC生产
近岸蛋白提供mRNA合成及修饰用原料酶及试剂。所有产品均采用药用规格原辅料生产，符合GMP规范的产品生产与质量管理规程，保障生产过程及所有原辅料可追溯。
产品特点：
为客户提供全套的原料放行方案，全套酶产品已完成FDA DMF申报备案，通过HALAL清真认证
GMP级生产管理体系，设计50亿人份产能
100余家国内外客户的信任之选，其中2家客户产品获国内外EUA
| 质粒线性化 |
体外转录 |
加帽修饰 |
加尾修饰 |
| BsaI |
T7 RNA Polymerase |
Vaccinia Capping Enzyme |
E.coli Poly(A) Polymerase |
| BspQI |
RNase Inhibitor |
2′-O-Methyltransferase |
|
| XbaI |
Pyrophosphatase, Inorganic (yeast) |
SAM |
|
|
T7 RNA Transcription Enzyme Mix |
|
|
|
NTPs |
|
|
|
N1-Me-pUTP/pUTP |
|
|
|
CAP1 GAG/CAP1 GAG(3''OMe) |
|
|
并提供CMC生产服务，涵盖大规模质粒制备、大规模mRNA制备、LNP-mRNA包封及工艺开发。
2.3 CMC质量控制
| 产品 |
服务 |
| 加帽率检测样品处理试剂盒 |
完整性/加帽率/加尾检测 |
| RNase H/RNase T1/Oligo(dT)磁珠 |
dsRNA/DNA等残留检测 |
| 原料酶/DNase/RNase残留检测试剂盒 |
包封率/粒径/zeta电位检测 |
| E.coli DNA 残留检测试剂盒/兼容数字PCR平台qPCR Mix |
|
| NovoFast dsRNA ELISA Kit |
|
2.4 体外药效评估
在疫苗的体外药效评估阶段，近岸蛋白可以提供生物学活性验证（细胞、小动物）、细胞与体液免疫评价相关抗原、抗体及对照用mRNA。
对照用报告基因
| eGFP mRNA |
Luciferase mRNA |
mCherry mRNA |
| eGFP circRNA |
Luciferase circRNA |
|
基于高品质原料与成熟的技术平台，近岸蛋白可为RABV、RSV、VZV、SARS-CoV-2、Influenza A/B、MPXV、HSV、ASFV、PEDV、PRV、PRRSV等人和动物的创新疫苗研发与工艺研究提供解决方案，欢迎咨询。