来源 :近岸蛋白2023-07-13
mRNA技术在新冠疫苗开发中的成功应用，不仅是疫苗领域的技术突破，也是传染病预防、肿瘤治疗、蛋白替代疗法等领域的全新研发路径。自第一款mRNA疫苗上市后，至今已有越来越多的企业开辟了相关管线，众多项目进入了临床阶段。
7月12日，在同写意全球生物医药前沿技术大会上，近岸蛋白董事长朱化星博士在RNA制药与疫苗开发论坛中发布了“一管式”高效mRNA合成工艺，得到了与会人员和同行的高度关注。
“一管式”mRNA合成工艺涵盖了线性化模板制备——体外转录（In Vitro Transcription, IVT）——酶法加帽流程，整个过程省去了传统工艺中两步纯化步骤，大大提高的mRNA的生产效率。
在该工艺中，近岸蛋白探索了不同限制性内切酶在不同IVT体系中，酶切后不纯化，直接进行IVT实验在产量、完整性以及加帽率等方面的表现，发现不纯化得到的mRNA质量与纯化无明显差别，但因为省略了一步纯化工艺，大大减少了线性化质粒模板的损失，因此最终得到的mRNA产量更高。
图例）分别使用BsaI和BspQI两种限制性内切酶进行酶切，对比酶切后纯化与不纯化工艺，在mRNA产量、完整性以及加帽率方面无明显差异。
体外合成的RNA需要通过一定的合成过程完成5’端帽结构的添加，从而形成完整的mRNA结构。mRNA的完整性确保了蛋白质的准确翻译，5’-Cap帽结构修饰可以保护mRNA免受5''-外切酶活性降解、有效促进翻译的起始、降低免疫原性。常用的加帽工艺有两类，一类是在IVT结束后，通过牛痘病毒加帽酶和2’-O-甲基转移酶的共同作用，完成Cap1的修饰；一类是在IVT过程中，通过在体系内引入帽类似物，完成帽结构的修饰。两种方式在工艺、结果以及知识产权壁垒等方面各不相同。
由于帽类似物的专利限制，越来越多的mRNA研究人员倾向使用酶法加帽。然而传统的酶法加帽工艺存在IVT与加帽反应体系不兼容问题，导致在IVT结束后，必须通过一步纯化工艺置换反应缓冲液后才可以进行酶法加帽，这无疑增加了后期放大工艺的复杂性。近岸蛋白经过不断地研究探索，开创性推出“一管式”酶法加帽工艺，相较于传统工艺，“一管式”工艺具备生产效率高、mRNA产量高等明显优势：
一管式合成eGFP mRNA与传统工艺相比，mRNA检测结果无明显差异：
一管式合成Luciferase mRNA与传统工艺相比，mRNA检测结果无明显差异：
近岸蛋白“一管式”mRNA合成工艺已提交发明专利申请（申请号：202310338519X），在论坛上，朱化星博士强调，近岸蛋白致力于为整个行业提供可靠有效的整体解决方案，除了原材料的供应链支持，更希望能够协助客户建立一些新的方法学研究，为下游客户赋能。因此，在合作模式上也是开放式合作，专利无偿开放给所有合作客户，共同促进mRNA行业发展。
欢迎大家一起回顾近岸蛋白“一管式”mRNA合成工艺发布现场以及在同写意全球生物医药前沿技术大会的精彩视频。
近岸蛋白mRNA原料/服务一站式解决方案：
相关产品：
| 应用场景 |
目录号 |
产品名称 |
| 质粒线性化 |
GMP-RE057 |
BspQI, GMP Grade |
| GMP-EB057 |
10×BspQI Reaction Buffer, GMP Grade |
| GMP-RE026 |
BsaI, GMP Grade |
| GMP-EB026 |
10×BsaI Reaction Buffer , GMP Grade |
| GMP-RE015 |
XbaI, GMP Grade |
| GMP-EB015 |
10×XbaI Reaction Reaction Buffer, GMP Grade |
| mRNA体外转录 |
GMP-E121 |
T7 RNA Polymerase, GMP Grade |
| GMP-EB231 |
10×Transcription Buffer, GMP Grade |
| GMP-E125 |
RNase Inhibitor, GMP Grade |
| GMP-M036 |
Pyrophosphatase, Inorganic （yeast）, GMP Grade |
| GMP-E131 |
T7 RNA Transcription Enzyme Mix, GMP Grade |
| GMP-S023A |
ATP, GMP Grade （100mM） |
| GMP-S023N |
ATP, GMP Grade （10mM） |
| GMP-S024A |
GTP, GMP Grade （100mM） |
| GMP-S024N |
GTP, GMP Grade （10mM） |
| GMP-S025A |
CTP, GMP Grade （100mM） |
| GMP-S026A |
UTP, GMP Grade （100mM） |
| GMP-S042 |
N1-Me-Pseudo UTP, GMP Grade |
| GMP-S048 |
Pseudo UTP, GMP Grade |
| E131 |
T7 High Yield RNA Transcription kit |
| E135 |
Thermostable T7 RNA Polymerase |
| 双链DNA模板去除 |
GMP-E127 |
DNase I, GMP Grade |
| mRNA加帽修饰 |
GMP-M062 |
Vaccinia Capping Enzyme, GMP Grade |
| GMP-M072 |
mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase, GMP Grade |
| GMP-EB62 |
10×Capping Reaction Buffer, GMP Grade |
| GMP-S062 |
SAM (32mM), GMP Grade |
| M082 |
Cap 1 Capping System |
| GMP-S201 |
CAP1 GAG, GMP Grade |
| GMP-S202 |
CAP1 GAG (3''OMe), GMP Grade |
| mRNA加尾修饰 |
GMP-M012 |
E. coli Poly(A) Polymerase, GMP Grade |
| GMP-EB12 |
10×Poly(A) Polymerase Buffer, GMP Grade |
| mRNA成品 |
MR008/MR010 |
eGFP mRNA/eGFP mRNA（N1-Me-Pseudo UTP） |
| MR009/MR011 |
Luciferase mRNA/Firefly Luciferase mRNA (N1-Me-Pseudo UTP) |
| MR201 |
eGFP CircRNA |
| MR105 |
mCherry mRNA（N1-Me-Pseudo UTP） |
| MR015 |
OVA mRNA（N1-Me-Pseudo UTP） |
| MR016 |
hEPO mRNA（N1-Me-Pseudo UTP） |
| MR019 |
Cas9 mRNA（ N1-Me-Pseudo UTP） |
| mRNA加帽检测 |
CD001 |
mRNA Capping Detection Sample Preparation Kit（Beads） |
| E134 |
Thermostable RNase H |
| mRNA加尾检测 |
E151 |
RNase T1 |
| mRNA原料酶鉴别 |
PA007 |
mRNA Enzymes DIBA Kit |
| mRNA原料酶残留检测 |
PA101 |
Pyrophosphatase, Inorganic ELISA Kit |
| RNase残留检测 |
DT007 |
RNase Detection Kit |
| mRNA纯化 |
N243 |
RNA Clean Beads |
| S125 |
Lithium Chloride Precipitation Solution |
| 无酶水 |
E132 |
RNase Free Water |
苏州近岸蛋白质科技股份有限公司（简称近岸蛋白）深耕重组蛋白行业十余年，是一家专注于蛋白质技术与应用解决方案的高新技术企业，主营业务为生物药、体外诊断、mRNA疫苗药物、生命科学基础研究等领域的原料与技术解决方案，包括靶点及因子类蛋白、重组抗体、酶及试剂的研发、生产和销售及相关技术服务。公司在上海、苏州和菏泽建有研发、生产基地。